稳定性研究资料
稳定性研究资料
修订历史
序号 | 版本 | 修订 | 修订部分及内容 | 修订日期 |
1 | A1.0 | 李张宁 | 无 | 2026.4.16 |
2 |
编制：李张宁 | 日期：2026.04.16 |
复核：乔燕春 | 日期：2026.04.17 |
批准：吴小峰 | 日期：2026.04.17 |
1目的
确定冻干型qPCRMix（冻干微球）常温存放的稳定性。
2适用范围
冻干型qPCRMIX（冻干微球）
3参考标准
《体外诊断试剂稳定性评价技术指导原则》
《冻干型分子诊断试剂质量控制标准》
4试验材料
4.1检测试剂
产品名称 | qPCR-RTMIX冻干球（20μL体系/人份） |
生产日期 | 20220602（常温存放3年10个月） |
生成日期 | 20260120（新批次对照） |
新冠标准品 | 1000000copies/ml |
4.2校准/质控品
新冠病毒企业标准品（1000000copies/ml浓度阳性参考品）
4.3主要仪器
雅睿实时荧光定量PCR仪
5评估方法
5.1常温长期稳定性试验
将已常温（15~30℃）存放（避光环境）3年10个月20220602批次Mix冻干球，与20260120新批次平行检测。检测指标：外观、Ct值、检出率、扩增效率、阴性对照（NTC）。
5.2热加速稳定性试验
将20260120批次Mix冻干球置于55℃加速老化箱，分别于放置7天、14天、22天、30、40天取样检测性能。
5.3试验配制
试剂 | 使用量 | 终浓度 |
冻干球 | 1颗 | 1x |
新冠ORF正向引物(10uM) | 0.4ul | 0.2uM |
新冠ORF反向引物(10uM) | 0.4ul | 0.2uM |
新冠ORF探针（5uM） | 0.4ul | 0.1um |
新冠N正向引物(10uM) | 0.4ul | 0.2uM |
新冠N反向引物(10uM) | 0.4ul | 0.2uM |
新冠N探针（5uM） | 0.4ul | 0.1um |
模板 | Xul | 10~2000ng/20ul |
Nuclease-FreeWater | TO20ul |
反应程序：
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
逆转录 | 50℃ | 5min | 1cycle |
预变性 | 95℃ | 3min | 1cycle |
变性、退火、延伸 | 95℃ | 10s | 45cycles |
60℃（靶标采集FAM,VIC） | 30s |
*检测通道：FAM（ORF基因）、VIC（N基因）
6接受标准
Ø外观：冻干微球完整、无塌陷、无吸潮、无碎裂。
Ø检出率：低浓度阳性标准品100%检出。
ØCt值偏差：新旧批次Ct差值≤0.8，无明显延后。
Ø扩增性能：曲线正常，无抑制、无非特异性扩增。
Ø阴性对照：NTC无扩增，无假阳性。
7质量控制与安全
Ø实验严格分区操作，防止气溶胶污染。
Ø冻干试剂复溶后立即使用，避免反复冻融。
Ø充分混匀，避免基线不稳。
Ø实验废弃物按生物安全要求处理。
8试验
8.120220602批次冻干球稳定性测试
8.1.1外观检测：两批次冻干球外形无差异，均饱满圆滑无塌陷萎缩（下图）。
8..1.2性能检测
8..1.2.1扩增曲线
8.1.2.2数据分析
检测样品 | 标准品加入量 | Ct | 结果 | 判定 | |
FAM(ORF) | VIC(N) | ||||
20260120（新批次） | 标准品10μL | 29.8 | 29.03 | 阳性 | 合格 |
20260120（新批次） | 标准品1μL | 34.76 | 32.67 | 阳性 | 合格 |
20260120（新批次） | （标准品稀释10倍）10μL | 33.34 | 32.54 | 阳性 | 合格 |
20260120（新批次） | （标准品稀释10倍）1μL | 38.9 | 36.4 | 阳性 | 合格 |
20220602（3年10个月） | 标准品10μL | 28.08 | 28.17 | 阳性 | 合格 |
20220602（3年10个月） | 标准品1μL | 32.38 | 32.38 | 阳性 | 合格 |
20220602（3年10个月） | （标准品稀释10倍）10μL | 32.23 | 32.04 | 阳性 | 合格 |
20220602（3年10个月） | （标准品稀释10倍）1μL | 36.1 | 35.77 | 阳性 | 合格 |
NTC阴性对照 | 无Ct | 无Ct | 阴性 | 合格 | |
8.1.2.3测试结论
20220602批次冻干球再常温存储3年10个月后仍保持性能稳定，外观正常。
8.255℃热加速稳定性测试
8.2.1结果数据分析
热胁迫条件 | 检测时间 | 外观 | Ct偏差 | 性能判定 |
55℃加速箱 | 7天 | 合格 | ≤0.5 | 合格 |
55℃加速箱 | 14天 | 合格 | ≤0.5 | 合格 |
55℃加速箱 | 22天 | 合格 | ≤0.5 | 合格 |
55℃加速箱 | 30天 | 合格 | ≤0.5 | 合格 |
55℃加速箱 | 30天 | 合格 | ≤0.5 | 合格 |
8.2.2测试结论
Ø低浓度标准品100%检出，Ct值无延后、无衰减。
Ø55℃热加速40天性能无下降，验证产品具备优异热稳定性。
9总结
Ø20220602批次冻干Mix常温存放3年10个月后，外观正常、扩增性能稳定。
Ø低浓度标准品100%检出，Ct值无延后、无衰减，部分指标略优于新批次。
Ø55℃热加速40天性能无下降，验证产品具备优异热稳定性。
Ø本品可支持常温≥36个月（3年）稳定存放。